牙龈卟啉单胞菌菌毛fimA基因的克隆及表达纯化

• 作者: 于飞 何伟 刘薇 陈卫民
• 来源期刊: 华西口腔医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 牙龈卟啉单胞菌 菌毛蛋白A 蛋白表达
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 614-617
• 页数: 4页
• 分类号: R781.4
• 字数: 3971字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1182.2009.06.009

摘要

目的 克隆牙龈卟啉单胞菌菌毛fimA基因并使其在大肠杆菌中正确表达.方法 利用PCR方法克隆牙龈卟啉单胞菌fimA基因,构建其原核表达质粒pT-BAD/fimA,获得其在大肠杆菌中的表达,基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定重组蛋白.以不同质量浓度咪唑缓冲液(250、200、150、100、50 μmol·L~(-1))洗脱结合在His-tag纯化柱的目的蛋白,选择最佳洗脱质量浓度.结果 克隆基因测序结果与GeneBank数据库中的序列呈现99.9%同源性;诱导表达后可观察到相对分子量3.8x10~4的融合蛋白,经MALDI-TOF-MS检测进一步证实为FimA蛋白.100 μmol·L~(-1)咪唑缓冲液洗脱得到的蛋白质纯度最高,其纯度为95%.结论 本实验成功克隆了fimA基因,并获得在大肠杆菌中的正确表达,同时得到纯度较高的FimA蛋白,为后续研制增强免疫应答的高效牙周炎真核表达质粒奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何伟	华中科技大学同济医学院附属同济医院口腔医学中心	39	267	9.0	15.0
2	陈卫民	华中科技大学同济医学院附属同济医院口腔医学中心	129	662	13.0	18.0
3	刘薇	华中科技大学同济医学院附属同济医院口腔医学中心	24	91	5.0	8.0
4	于飞	华中科技大学同济医学院附属同济医院口腔医学中心	31	131	7.0	10.0