人野生型和A53T突变型α-突触核蛋白慢病毒表达载体的构建及在PC12细胞中的转染

• 作者: 兰丹梅 王坚 苏雅茹 蒋雨平 邬剑军 陈嬿
• 来源期刊: 神经解剖学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: α-突触核蛋白 慢病毒表达载体 PC12细胞 Parkinson病 转基因细胞 突变基因
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 原著
• 页码范围: 289-294
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 语种: 中文

摘要

为构建长期稳定表达人野生型和A53T突变型α-突触核蛋白的PC12细胞株,我们首先制备了慢病毒表达载体,经测序鉴定正确后转染PC12细胞,然后通过细胞的免疫荧光染色检测α-synuclein-V5融合蛋白,PCR法扩增转基因PC12细胞的SNCA片段后进行测序检测突变基因,以及Western blot法检测PC12细胞α-synuclein的表达,从而鉴定转基因细胞能否稳定表达目的基因.结果显示:经测序,pLenti6/V5-SNCA-WT和pLenti6/V5-SNCA-A53T表达质粒构建成功;免疫荧光染色示基因转染后,超过95%的PC12细胞中有α-synuclein-V5融合蛋白表达;转基因细胞的SNCA片段测序结果显示,慢病毒表达载体成功整合入PC12细胞基因组;Weatern blot法检测结果示转基因PC12细胞能够过表达α-synuclein蛋白.以上结果表明我们已成功构建了人野生型和AS3T突变型α-突触核蛋白慢病毒表达载体,并且成功建立了稳定的过表达人野生型和AS3T突变型α-突触核蛋白的PC12细胞株,这为进一步研究α-突触核蛋白的生理功能及其在Parkinson病发病机制中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蒋雨平	复旦大学附属华山医院神经内科	243	1451	17.0	25.0
2	陈嬿	复旦大学附属华山医院神经内科	37	129	7.0	10.0
3	王坚	复旦大学附属华山医院神经内科	226	1285	17.0	23.0
4	苏雅茹	复旦大学附属华山医院神经内科	9	167	6.0	9.0
5	邬剑军	复旦大学附属华山医院神经内科	52	218	9.0	10.0
6	兰丹梅	复旦大学附属华山医院神经内科	3	19	3.0	3.0