人野生型和突变型CITED2真核表达质粒的构建与表达

• 作者: 吴晓云 杨晓菲 田杰 胡计华 邓兵 郑敏
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因,CITED2 突变 心脏缺损,先天性 真核表达质粒
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 基础论著
• 页码范围: 300-303
• 分类号: R541.1
• 语种: 中文

摘要

目的 构建人转录辅助因子CITED2突变型(c.573-578del6)及野生型真核表达质粒并检测两种重组质粒CITED2蛋白的表达情况.方法 分别以健康儿童和CITED2基因突变的先天性心脏病患儿血细胞DNA为模板,PCR定向克隆扩增野生型和突变型CITED2编码链,分别T/A克隆至pMD19-T simple质粒上,筛选出野生型和突变型CITED2的T载体重组质粒.应用DNA重组技术将T载体重组质粒上的CITED2基因片段亚克隆入真核表达载体pEGFP-C1,构建pEGFP-C1-wtCITED2和pEGFP-C1-mtCITED2真核表达质粒,并分别转染至HEK293细胞,24h后在荧光显微镜下观察质粒转染情况,48h后应用流式细胞仪检测转染效率,Western blotting检测CITED2蛋白的表达.结果 成功构建了人野生型pEGFP-C1-wtCITED2和突变型pEGFP-C1-mtCITED2真核表达质粒.转染至HEK293细胞后24h,在荧光显微镜下可观察到各转染组EGFP的表达,转染后48h流式细胞仪检测转染效率为50％ ～ 60％,Western blotting检测可见CITED2蛋白与EGFP的融合表达.结论 成功构建了人转录辅助因子CITED2突变型及野生型真核表达质粒,并检测到CITED2蛋白的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡计华	重庆重庆医科大学附属儿童医院心脏中心	1	1	1.0	1.0
2	吴晓云	重庆重庆医科大学附属儿童医院心脏中心	1	1	1.0	1.0
3	杨晓菲	重庆重庆医科大学附属儿童医院心脏中心	1	1	1.0	1.0
4	郑敏	重庆重庆医科大学附属儿童医院心脏中心	1	1	1.0	1.0
5	田杰	重庆重庆医科大学附属儿童医院心脏中心	1	1	1.0	1.0