野生型与突变型ATP6V1B2基因表达载体的构建及功能鉴定

• 作者: 戴朴 袁永一 辛凤 郭维维 韩东一
• 来源期刊: 中华耳科学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: ATP6V1B2 质粒 表达
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 姜泗长教授百年诞辰纪念专辑
• 页码范围: 335-339
• 页数: 5页
• 分类号: R349.6
• 字数: 3468字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-2922.2013.03.002

摘要

目的构建ATP6V1B2基因野生型及c.1516 C>T突变型和绿色荧光蛋白基因PEGFP的真核共表达载体，为指导ATP6V1B2基因的功能研究奠定基础。方法应用基因重组技术、限制性内切酶酶切技术、定点诱变及基因测序方法，构建并鉴定野生型(pIRES2-EGFP-ATP6V1B2)和突变型(pIRES2-EGFP-ATP6V1B2- c.1516 C>T)真核表达质粒。经脂质体介导转染293细胞系，荧光显微镜下观察二者的表达。检测转染细胞内V-ATPase的水解活性和H+转运活性。结果阳性重组子经酶切鉴定野生型和含有c.1516 C>T突变型ATP6V1B2基因片段，基因测序结果正确。重组野生型和突变型真核表达质粒转染293细胞系24小时后，荧光显微镜下可见胞浆内有绿色荧光表达。转染48小时后检测突变型真核表达质粒转染的细胞V-ATPase水解活性降低，细胞溶酶体PH值升高。结论本研究成功地构建了ATP6V1B2基因野生型及c.1516 C>T突变型和PEGFP基因的真核共表达载体，且能在293细胞系中表达，功能研究证实c.1516 C>T突变导致V-ATPase水解活性降低，H+转运活性下降，细胞溶酶体酸度减低。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩东一	解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科解放军耳鼻咽喉研究所	164	1475	20.0	31.0
2	戴朴	解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科解放军耳鼻咽喉研究所	92	718	14.0	23.0
3	郭维维	解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科解放军耳鼻咽喉研究所	27	103	6.0	8.0
4	袁永一	解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科解放军耳鼻咽喉研究所	33	220	8.0	14.0
5	辛凤	解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科解放军耳鼻咽喉研究所	4	11	2.0	3.0