一种用于白念珠菌基因敲除的新型载体的构建

• 作者: 张永信 胡辉
• 来源期刊: 中华传染病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 念珠菌 白色 Zeocin 基因敲除技术 微生物敏感性试验 重组 遗传
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 基础论著
• 页码范围: 65-68
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3609字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1000-6680.2009.02.001

摘要

目的 探讨对抗生素Zeocin耐药作为一种新的筛选标记用于白念珠菌基因敲除的可行性.方法药物敏感试验检测在不同pH值下Zeocin对白念珠菌的最低抑菌浓度(MIC).PCR法扩增出Zeocin耐药基因--ZeoR,基因拼接方法构建出用于AAF1基因敲除的整合型载体pHS1-Zeo-HS2,并进行测序鉴定.氯化锂法将此整合型载体转化白念珠菌CAI4,对目的基因AAF1进行替换.Zeocin筛选出重组白念珠菌,提取重组菌基因组,用两组引物进行PCR扩增,进行遗传学鉴定.结果不同pH值下白念珠菌对Zeocin均敏感,并确定100 mg/L为筛选浓度.测序鉴定成功拼接出用于白念珠菌基因敲除的整合型载体.耐Zeocin重组白念珠菌使用PCR方法和测序鉴定,发现原AAF1基因已被ZeoR基因替代.结论成功构建可用于白念珠菌基因敲除的新型载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张永信	复旦大学附属华山医院感染科	122	932	18.0	24.0
2	胡辉	复旦大学附属华山医院感染科	4	29	3.0	4.0