绵羊生长激素基因的克隆、序列分析及真核表达

• 作者: 刘守仁 杨华 沈敏 王新华 甘尚权 钟发刚 陈晓军
• 来源期刊: 新疆农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 绵羊 生长激素 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 页码范围: 466-473
• 页数: 8页
• 分类号: S826
• 字数: 4318字
• 语种: 中文

摘要

利用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,从新疆阿勒泰×中国美利奴杂交F1代绵羊脑垂体总RNA扩增出编码绵羊生长激素(oGH)基因序列,T-A克隆入载体质粒pT-Adv.测序结果表明所克隆的oGH cDNA在重组质粒的阅读框架是正确的,共含有654个碱基,其核苷酸序列与已知的3条绵羊序列相比共有7个碱基的差异,除第472位和529位的碱基差异能够引起氨基酸序列的变化外,其余均为无义突变,说明从新疆阿勒泰×中国美利奴杂交绵羊中获得的羊生长激素存在有不同品系间的基因多态性变化.将重组质粒pT-Adv/oGH cDNA定向克隆入真核表达载体质粒pcDNA3.1/myc-HisA,构建成重组oGH基因的真核表达载体pcDNA3.1A/oGH.利用脂质体转染法,将重组质粒导入到小鼠骨髓瘤(SP2/0)细胞中,经间接ELISA检测,证明在转染细胞的上清中存在有目的基因产物的外泌表达.