利用抑制性消减杂交技术筛选大鼠哮喘相关基因

• 作者: Muhammad Shahzad 吕社民 宁启兰 张富军 杨旭东 王慧莲 钟波 韩燕
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 哮喘/免疫学 哮喘/病理生理学 抑制性消减杂交 差异性表达基因 cDNA文库
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 362-369
• 页数: 8页
• 分类号: R562.25
• 字数: 4765字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2009.04.007

摘要

目的:利用哮喘大鼠模型筛选与哮喘发病相关的差异性表达基因.方法:采用抑制性消减杂交技术,以哮喘大鼠肺组织总RNA为检验子,对照大鼠肺组织总RNA为驱赶子,将消减杂交获得的DNA片断与pGEM-T Easy Vector连接,构建cDNA文库后,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆.将获得的阳性克隆插入片段进行测序分析,测序结果与GenBank数据库中cDNA和EST序列进行相似性比对,获得差异性表达基因的信息.结果:扩增消减cDNA文库获得300余个白色克隆,随即挑选36个测序,除去重复序列,结果中含有已知的基因4 个,ESTs 2个及与任何序列无同源性的新基因片段3个.结论:成功构建了哮喘大鼠肺脏差异性表达基因的正向消减cDNA文库,筛选出数个与哮喘相关的差异表达基因.