GM-CSF-Survivin融合基因的构建及其在树突状细胞的表达

• 作者: 张文彬 查晓 陈廷清 黄建鸣
• 来源期刊: 肿瘤预防与治疗
• 学科: 医学
• 关键词: GM-CSF Survivin 融合基因 树突状细胞
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 应用基础研究
• 页码范围: 135-138,后插1
• 页数: 5页
• 分类号: R73-35+4
• 字数: 3525字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-0904.2009.02.005

摘要

目的:构建以Survivin为肿瘤抗原,GM-CSF为基因佐剂的融合基因,并将该融合基因转入DC,研究DC疫苗抗肿瘤治疗的新方法.方法:参照GenBank收载的Survivin基因序列设计引物,提取HT-29肿瘤细胞中的mRNA,经RT-PCR反应获得野生型Survivin cDNA基因片段.人工合成GM-CSF、Survivin两端和中间连接接头引物.PCR反应获得GM-CSF、Survivin DNA片段.经BamHⅠ酶切,T4DNA连接酶连接获得GM-CSF-Survlvin融合DNA.以此DNA为模板,用两端引物作PCR扩增以获得较纯的融合DNA片段.经EcoRⅠ、HindⅢ双酶切后与相同双酶切的pcDNA3.1(-)载体质粒混合,加入T4DNA连接酶,16℃连接20h.用连接物转化大肠杆菌DHSα,挑选克隆提取质粒.结果:经PCR和限制性内切酶酶切初步鉴定后,选取一株送样作DNA序列测定,结果与设计序列完全一致.质粒定名为pcGM-Sur,用jetPEITM-Macrophage转染体系,将构建的pcGM-Sur质粒转染DC.采用RT-PCR和Western blot检测到DC中的融合基因mRNA和表达的Survivin抗原.结论:质粒pcGM-Sur DNA序列与设计完全一致,转染DC后能转录出完整的融合基因mRNA并表达出具有Survivin抗原性的融合蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄建鸣		40	120	6.0	7.0
2	查晓		26	83	5.0	7.0
3	张文彬		8	79	4.0	8.0
4	陈廷清		2	4	1.0	2.0