前列腺癌免疫治疗中质粒pLenti6/V5-D-TOPO(R)-TβRⅡDNglytk构建的意义及相应慢病毒的产生

• 作者: 刘妍 张婷 张志宏 徐勇 杨阔 畅继武
• 来源期刊: 中华内分泌外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 前列腺癌 转化生长因子 慢病毒 肿瘤免疫治疗 基因转导
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 296-303
• 页数: 8页
• 分类号: R737.25|R73.3
• 字数: 4684字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1674-6090.2009.05.003

摘要

目的 构建含有TβRⅡDNglytk的慢病毒质粒载体,生产出相应的慢病毒,用于对TGF-β失敏感的CTL的制备.方法 先以原始质粒为模板,PCR扩增TβRⅡDN和HSV-tk基因,用重组PCR方法获得TβRⅡDNglytk融合基因,用PCR扩增出TRANSglytk基因;再用TOPO克隆技术将其连接到慢病毒表达质粒,经测序验证;最后用Invitrogen公司提供的ViraPowerTM Lentiviral System和293FT细胞合成慢病毒,并用293细胞完成其滴度测定.结果 完成慢病毒质粒TβRⅡDNglytk的构建,经测序验证序列正确;生产的慢病毒具有感染能力,其滴度达到实验要求,可用于对TGF-β不敏感的肿瘤特异性CTL的制备.结论 运用重组PCR技术合成TβRⅡDNglytk及TRANSglytk两个融合基因,并用TOPO克隆技术连接到pLenti6/V5-D-TOPO(R)载体,成功构建了慢病毒表达载体,说明此方法用于病毒载体的构建是快捷可行的;用ViraPowerTM Lentiviral System和293FT细胞成功制备了慢病毒,为生产TGF-β不敏感的人肿瘤特异性CTL提供了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐勇	天津医科大学第二医院泌尿外科	133	495	12.0	14.0
2	畅继武	天津市泌尿外科研究所天津市泌尿外科重点实验室	55	160	7.0	9.0
3	张志宏	天津医科大学第二医院泌尿外科	44	198	9.0	11.0
4	杨阔	天津市泌尿外科研究所天津市泌尿外科重点实验室	14	57	4.0	7.0
5	刘妍	天津市泌尿外科研究所天津市泌尿外科重点实验室	15	60	4.0	7.0
6	张婷	天津市泌尿外科研究所天津市泌尿外科重点实验室	2	1	1.0	1.0