Sedlin突变体S124A对其与PAM14相互作用的影响

• 作者: 刘晓颖 张庆慧 朱恒锐 武标 汪云飞 范礼斌 邢昕
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 蛋白质类/遗传学 酵母菌/遗传学 双杂交系统技术 骨骺 脊柱/畸形
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 10-13
• 页数: 4页
• 分类号: R329.2|R341|R342.3|R379|R394-33|R394.2
• 字数: 2904字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2009.01.003

摘要

目的 构建Sedlin的点突变体,研究其与PAM14在酵母中的相互作用,寻找其相互作用的位点.方法 用蛋白质在线序列分析软件CPHmodels预测Sedlin蛋白的磷酸化位点,可能的磷酸化位点主要有S2、S30、S119、S124、Y115,针对其中一个磷酸化位点(S124)设计定点突变引物;以pAS-Sedlin为模板,以两条含有突变位点的互补序列为引物进行PCR扩增,将得到的PCR产物用Dpn Ⅰ酶切除去模板,消化产物转化大肠杆菌感受态DH5α,对得到的阳性克隆进行测序;将构建的定点突变质粒pAS-sedIins与pACT2-PAM14共转化至酵母Y190中,并对生长至合适大小的克隆进行B-半乳糖苷酶活性分析.结果 构建了pAS-Sedlin的定点突变质粒pAS-SedlinS,其与pACT2-PAM14共转克隆的β-半乳糖苷酶活性反应呈阳性,并且Sedlin S124A蛋白与PAM14蛋白的相互作用比野生型Sedlin蛋白与PAM14蛋白相互作用强.结论 成功构建了Sedlin S124A,Sedlin蛋白的S124并不是其与PAM14在酵母中相互作用的特异性结合位点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	范礼斌	安徽医科大学生物教研室	53	174	8.0	9.0
2	刘晓颖	安徽医科大学生物教研室	57	121	6.0	8.0
3	汪云飞	安徽医科大学生物教研室	5	1	1.0	1.0
4	朱恒锐	安徽医科大学生物教研室	5	1	1.0	1.0
5	邢昕	安徽医科大学生物教研室	4	10	1.0	3.0
6	武标	安徽医科大学生物教研室	5	10	1.0	3.0