快速鉴定苯丙酮尿症模型小鼠基因型的新方法应用

• 作者: 刘冕 刘敬忠 周淑佩 肖白 贾兴元 韩瀚 高斌
• 来源期刊: 诊断学理论与实践
• 学科: 医学
• 关键词: 实时聚合酶链反应 变性高效液相色谱 基因突变 检测 苯丙酮尿症模型小鼠
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 631-634
• 页数: 4页
• 分类号: R446.11+9
• 字数: 3435字
• 语种: 中文

摘要

目的:建立融解曲线法和变性高效液相色谱(DHPLC)法准确、快速地鉴定苯丙酮尿症(PKU)模型小鼠的基因型.方法:融解曲线法采用聚合酶链反应(PCR)扩增包含模型小鼠pah基因点突变位点序列的132 bp片段,将该产物予Alw 26I酶切后,加入微量SYBR Green I,在实时PCR仪上行融解曲线分析,同时,酶切产物行12%聚丙烯酰胺凝胶电泳分析.DHPLC法是直接将132 bp片段扩增产物采用在部分变性条件下(60.9℃)行DHPLC分析,根据不同图谱作出基因型诊断.结果:融解曲线分析表明,野生型小鼠的DNA片段在84℃和81℃出现2个融解峰,突变纯合型小鼠DNA片段在76.5～77.5℃和81℃出现2个融解峰,杂合型小鼠DNA片段则在84℃、81℃和76.5～77.5℃均出现融解峰,3种峰型明显可被区分.DHPLC优化了最佳分离效果的柱温,在优化的最佳条件下,DHPLC图谱显示杂合型小鼠DNA具有显著特色的峰型,即除同源双链峰外,出现一个异源双链峰.上述2种新方法共检测了PKU模型小鼠突变纯合型20只、杂合型22只,野生型11只,2种方法检测结果一致,并且与经典的聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法结果一致(动物毛色等表型也完全一致).结论:融解曲线法和DHPLC法均能准确、快速地鉴定模型小鼠的基因型,具有自动化、高通量等优点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	肖白	首都医科大学附属北京朝阳医院基础医学研究中心	50	287	10.0	15.0
2	周淑佩	北京大学医学部实验动物中心	31	164	7.0	11.0
3	贾兴元	首都医科大学附属北京朝阳医院基础医学研究中心	11	70	3.0	8.0
4	韩瀚	首都医科大学附属北京朝阳医院基础医学研究中心	3	19	2.0	3.0
5	高斌	首都医科大学附属北京朝阳医院基础医学研究中心	2	86	1.0	2.0
6	刘冕	北京大学医学部实验动物中心	4	7	2.0	2.0