舍格伦综合征A抗原(SSA60)在巴斯德毕赤酵母中的高效分泌表达及胶体金快速检测方法的建立

• 作者: 兰小鹏 张惠菊 徐秀云 杨湘越
• 来源期刊: 现代检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 舍格伦综合征A抗原 分泌表达 巴斯德毕赤酵母 斑点免疫金渗滤法
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 37-39
• 页数: 3页
• 分类号: R442.8|R392-33
• 字数: 2747字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7414.2009.01.013

摘要

目的 在巴斯德毕赤酵母中表达舍格伦综舍征A抗原(SSA60)并建立肢体金快速检测方法.方法 表达质粒pPIC9k-SSA60用电穿孔法转化酵母菌SMDI168,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选高拷贝转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达后,培养上清用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和斑点免疫金渗滤法(DIGFA)鉴定.结果 表达产物SSA60的分子量约60 000,高拷贝巴斯德毕赤酵母转化菌的表达水平明显高于低拷贝的,表达量占分泌总蛋白60%以上,产物浓度为600～950 mg/L.DIGFA检测85份舍格伦综合征(SS)患者血清和30份正常人血清,抗SSA检测阳性率为95.3%(81/85),特异度为100%(30/30).与德国欧蒙ENA酶斑点法对比检测的符合率为96.5%(111/115),差异无统计学意义(P>0.05).结论 SSA60在巴斯德毕赤酵母中获得高效分泌表达,DIGFA简便、快速、准确,可用于临床自身免疫病的诊断.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	兰小鹏	南京军区福州总医院全军医学检验中心	103	463	11.0	14.0
2	杨湘越	南京军区福州总医院全军医学检验中心	50	247	9.0	13.0
3	徐秀云	南京军区福州总医院全军医学检验中心	5	8	2.0	2.0
4	张惠菊	南京军区福州总医院全军医学检验中心	4	10	2.0	3.0