PSD-95及其突变体的重组腺病毒对皮质神经元的感染

• 作者: 侯筱宇 徐镇 杜彩萍
• 来源期刊: 徐州医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: PSD-95 腺病毒载体 酪氨酸磷酸化
• 年，卷（期）: 2009,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 561-565
• 页数: 5页
• 分类号: R34|R743
• 字数: 3848字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2065.2009.09.001

摘要

目的 构建PSD-95(postsynaptic density-95)及其突变体PSD-95Y523F和PSD-95Y533F(523和533位酪氨酸分别突变成苯丙氨酸)的复制缺陷型重组腺病毒载体,并检测腺病毒颗粒对体外原代培养皮质神经元的感染能力.方法 双酶切将PSD-95及其突变体的基因分别从载体pcDNA3.1(+) 亚克隆至穿梭载体pAdTrack-CMV中;电穿孔法将穿梭重组体转化到电转感受态细胞BJ5183中,使其与腺病毒骨架载体pAdEasy-1同源重组;同源重组体经PacⅠ酶切线性化,脂质体法转入HEK293H细胞中进行病毒包装;病毒颗粒分别感染HEK293T细胞和原代皮质神经元,荧光检测或免疫印迹方法 检测目的蛋白的表达水平.结果 经酶切电泳鉴定和序列测定证明同源重组体中含序列正确的目的基因;重组腺病毒颗粒感染HEK293T细胞后,免疫印迹显示有较高水平的目的蛋白表达;重组腺病毒具有感染原代皮质神经元的能力,在未成熟神经元(体外培养5～9天)中感染率低,而在成熟神经元(体外培养13天)中感染率较高.结论 成功构建了PSD-95、PSD-95Y523F、PSD-95Y533F的重组腺病毒载体;获得具有感染能力的重组腺病毒颗粒,易于感染成熟的神经元.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杜彩萍	江苏省脑病生物信息重点实验室徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心	3	1	1.0	1.0
2	侯筱宇	江苏省脑病生物信息重点实验室徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心	7	1	1.0	1.0
3	徐镇	江苏省脑病生物信息重点实验室徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心	1	1	1.0	1.0