携带人鞘氨醇激酶及突变体基因重组腺病毒载体的制备及表达

• 作者: 易军 段海峰 王立生 王莉 陈光辉 鲁茁壮
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 腺病毒科 鞘氨醇激酶 突变体
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 520-523
• 页数: 4页
• 分类号: Q814
• 字数: 4281字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2005.06.023

摘要

目的制备携带人野生型鞘氨醇激酶基因(SPKwt)及其突变体(SPKDN)的腺病毒载体,为研究SPK的生物学功能提供高效基因转移载体.方法将野生型和突变体SPK基因亚克隆至穿梭载体pshuttle-cmv,重组的穿梭质粒经Pme Ⅰ线性化后,电转化E. coli BJ-AD-1感受态,获得带有目的基因的腺病毒重组子质粒;重组子经Pac Ⅰ线性化后,以脂质体介导转染293包装细胞,获得重组腺病毒载体;分别行PCR鉴定重组腺病毒是否携带目的基因,Western blot鉴定目的基因是否表达,酶活性检测判断野生型基因和突变体基因表达活性.结果重组腺病毒带有目的基因,可以感染内皮细胞并正确表达,酶活性分析表明野生型SPK基因增强SPK活性,突变体SPK基因抑制SPK活性.结论成功构建了携带SPK野生型及其突受体的重组腺病毒,为研究SPK的功能提供了物质基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	段海峰	军事医学科学院二所	46	256	9.0	14.0
2	王立生	军事医学科学院二所	76	410	10.0	16.0
3	鲁茁壮	军事医学科学院二所	19	167	7.0	12.0