含新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶基因重组腺病素的构建及鉴定

• 作者: 刘妍 刘立明 李明 李霄 贾鹏 迟宝荣 金宁一 陆蕴松 陈漉 高鹏
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: NDV HN基因 重组腺病毒 抗肿瘤
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 肿瘤免疫学
• 页码范围: 132-135
• 页数: 4页
• 分类号: R392.12
• 字数: 3838字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建表达新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶(Hemagglutinin-neuramidinase,HN)基因的重组腺病毒,为进一步研究HN基因对消化道肿瘤的抑制作用及分子机制建立基础.方法:用BamHⅠ和XbaⅠ双酶切质粒pVHN,将获得的HN基因片段连接入穿梭质粒pacAd5 CMV K-N pA,构建含HN基因的穿梭质粒pacAd5-HN.利用PacⅠ单酶切对pacAd5-HN和腺病毒基因组质粒(pAd5)进行线性化处理后应用脂质体介导法共转染AAV-293细胞,分别利用蚀斑纯化和RT-PCR、Western blot等方法对重组病毒进行筛选和鉴定,并测定所获得重组病毒的滴度.结果:所构建重组病毒可有效表达HN基因,表达产物分子量约为63 kD,重组病毒滴度为108～1010 PFU/ml.结论:成功构建含HN基因的重组腺病毒,所获得重组病毒的滴度可以满足体内外实验要求.