寿光鸡腺苷酸琥珀酸裂解酶ADSL基因的表达与克隆化细胞株的筛选

• 作者: 关伟军 刘长青 唐学玺 张洪海 文杰 马月辉
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 寿光鸡 腺苷酸琥珀酸裂解酶 基因结构 基因表达 基因定位
• 年，卷（期）: 2009,（7）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 982-991
• 页数: 10页
• 分类号: S831.2|Q344.13
• 字数: 6711字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2009.07.004

摘要

利用RT-PCR与RACE方法检测寿光鸡心、肝、脾、肺、肾、脑、腿肌与胸肌8种组织腺苷酸琥珀酸裂解酶(ADSL)基因mRNA的差异表达水平,构建ADSL基因融合表达载体pGEX-ADSL,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性克隆,IPTG诱导表达,通过构建真核表达载体pEGFP-ADSL,利用脂质体介导法转染寿光鸡成纤维细胞,并进行阳性细胞的克隆化筛选与检测.结果表明:ADSL基因开放阅读框序列长为1455 bp,编码485个氨基酸;5′端非转录调控区具有典型管家基因的特征,在邻近起始密码子-28 bp处发生C→T突变,该突变使该位点变为核呼吸因子2(NRF-2)结合位点;经SDS-PAGE电泳显示,pGEX-ADSL重组融合蛋白在分子量约为80.5 ku处有特异的蛋白条带出现,与预期分子量大小一致,等电点为6.79,纯化后用Western-blot检测为寿光鸡ADSL蛋白.pEGFP-ADSL转染寿光鸡成纤维靶细胞后24、48和72 h,转染率在26.4%～41.2%之间,绿色荧光均匀分布于细胞质与细胞核中,随表达量的增加,绿色荧光在细胞核中聚集成团块状或颗粒状,经药物筛选和克隆化培养,获得表达pEGFP-ADSL融合蛋白的阳性克隆细胞株,经RT-PCR扩增与Western-blot检测确认ADSL融合蛋白基因已经整合到寿光鸡成纤维细胞的基因组中,获得正常表达.研究结果为揭示我国优良地方鸡种的风味基因结构,研究其生物学功能奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	关伟军	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所	168	1054	19.0	26.0
2	马月辉	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所	249	2266	26.0	35.0
3	唐学玺	中国海洋大学生命科学与技术学部	177	2051	23.0	31.0
4	张洪海	曲阜师范大学生命科学学院	46	405	12.0	18.0
5	刘长青	中国海洋大学生命科学与技术学部	32	120	6.0	9.0
8	文杰	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所	90	1414	20.0	35.0