细脚拟青霉腺苷酸琥珀酸合酶基因的克隆与表达分析

• 作者: 姚宇 李秀兰 杜林娜 杨晶 陈鸿兵 魏东旭
• 来源期刊: 黑龙江农业科学
• 关键词: 细脚拟青霉 腺苷酸琥珀酸合酶 基因克隆 序列分析 表达分析
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 遗传育种·生物技术
• 页码范围: 11-16
• 页数: 6页
• 字数: 4092字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11942/j.issn1002-2767.2018.06.0011

摘要

腺苷酸琥珀酸合酶(ADSS)为细脚拟青霉(Paecilomyces tenuipes)有效成分腺苷合成代谢途径的关键酶,而细脚拟青霉中腺苷酸琥珀酸合酶基因Ptadss的克隆与序列分析鲜见相关报道.本文在细脚拟青霉转录组测序结果的基础上,利用PCR技术克隆得到该菌Ptadss基因的cDNA序列,对Ptadss基因及其编码的蛋白进行生物信息学分析(相关理化性质、结构域、亲水性-疏水性、亚细胞定位、信号肽和高级结构等),并构建PtADSS与相关微生物ADSS的系统进化树.同时,采用实时荧光定量PCR技术,分析Ptadss基因在不同发酵阶段的细脚拟青霉菌丝体中的表达量,以初步明确该基因的表达量对于细脚拟青霉腺苷含量的影响.结果表明:克隆得到的Ptadss基因的ORF序列为1670 bp.该基因编码的蛋白的基本性质为:423个氨基酸残基、相对分子量为46.7663 kDa、等电点(pI)为5.59,含58个磷酸化位点,且该蛋白为定位于细胞质中的非分泌性和非跨膜的疏水性蛋白.结构预测结果表明该蛋白是由α-螺旋、β-转角、延伸链和无规则卷曲组成的复杂结构.序列分析结果提示,细脚拟青霉Ptadss基因与Cordyceps confragosa腺苷酸琥珀酸合酶基因同源性最高,可达91％.结合其他微生物的ADSS氨基酸序列构建系统树,结果表明细脚拟青霉与Cordyceps confragosa亲缘关系较近.另经对不同发酵阶段的细脚拟青霉中Ptadss的表达量及腺苷含量分析结果表明:Ptadss基因的表达水平与菌丝体中腺苷含量存在正相关性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杜林娜	吉林农业大学生命科学学院	10	4	1.0	2.0
5	李秀兰	吉林农业大学生命科学学院	3	3	1.0	1.0
6	魏东旭	吉林农业大学生命科学学院	4	4	1.0	2.0
7	陈鸿兵	吉林农业大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
8	姚宇	吉林农业大学生命科学学院	3	1	1.0	1.0