问号钩端螺旋体毒力相关蛋白InvA转录和表达特征的研究

• 作者: 严杰 李立伟 罗依惠 钱景 陈铭
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 问号钩端螺旋体 侵入/感染 invA基因 转录/表达
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 细菌学
• 页码范围: 24-28
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4035字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2009.01.006

摘要

目的 确定我国不同基因种问号钩端螺旋体(简称钩体)参考标准株携带毒力相关基因invA的情况,了解问号钩体赖株感染细胞前后invA基因转录和表达水平的变化.方法 采用PCR检测4个不同基因种问号钩体株及双曲钩体Patoc Ⅰ株invA基因.克隆问号钩体全长invA基因并测序,构建问号钩体黄疸出血群赖型赖株invA基因原核表达系统.Ni-NTA亲和层析法提纯目的重组蛋白rlnvA后免疫家兔获得抗血清,免疫双扩散法检测其效价.建立问号钩体赖株感染人胚肾上皮细胞HEK293模型,采用荧光定量RT-PCR和Western blot分别检测问号钩体赖株感染HEK293细胞前后invA基因的转录和表达水平的变化.结果 4个不同基因种的问号钩体株均含有invA基因,双曲钩体Patoc Ⅰ株则否.4株不同基因种的问号钩体invA基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.33%～100%和98.66%～100%.所构建的原核表达系统能有效地表达rInvA.rInvA兔抗血清免疫双扩效价为1:16.问号钩体赖株感染HEK293细胞30 min以后可大量黏附于细胞表面.问号钩体赖株感染HEK293细胞30 min时,invA基因mRNA水平明显上调,45 min时达到峰值,然后逐渐下降.问号钩体赖株感染HEK293细胞后45 min和60 min时可检出InvA蛋白,感染前及感染90 min以后检测结果均为阴性.结论 invA基因是致病性问号钩体所特有的基因.invA基因具有宿主细胞接触式表达及瞬时表达的特点,与问号钩体侵入宿主细胞密切相关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	严杰	浙江大学医学院病原生物学系	265	1149	14.0	20.0
2	李立伟	浙江大学医学院病原生物学系	34	277	7.0	15.0
3	钱景	浙江大学医学院病原生物学系	16	28	2.0	4.0
4	罗依惠	浙江大学医学院病原生物学系	14	68	6.0	7.0
5	陈铭	浙江大学生命科学学院生物信息学系	21	32	4.0	5.0