一种谷氨酸脱羧酶65相关肽融合蛋白的制备及其治疗1型糖尿病的药效研究

• 作者: 刘景晶 张会勇 曹荣月 李泰明 杨洁 王华倩 金亮 鲁勇
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 医学
• 关键词: 谷氨酸脱羧酶65 霍乱毒素B亚单位 治疗1型糖尿病 NOD小鼠
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 296-301,329
• 页数: 7页
• 分类号: Q78|R965.1
• 语种: 中文

摘要

使用基因工程方法构建了霍乱毒素B亚单位(Cholera toxin B subunit,CTB)与谷氨酸脱羧酶65(glutamic acid decarboxylase 65,GAD65)串联三肽GADⅢ(包括p217-236,p524-538,p290-306)合基因CTB-GADⅢ.将融合基因克隆到大肠杆菌表达载体pET-28a中,获得的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3).重组菌株经乳糖诱导后,其表达产物经过15%SDS-PAGE分析表明该菌株可以以包涵体形式表达融合蛋白,Mr约为17.6 k.含有CTB-GADⅢ重组蛋白的包涵体经过变性、复性、纯化后,可以得到五聚体结构的CTB-GADⅢ.神经节苷脂GM1(monosialoganglioside)结合实验表明重组CTB-GADⅢ蛋白可以与GM1特异性结合,表明该融合蛋白保持了CTB形成五聚体的生物活性.使用该重组蛋白在NOD小鼠周龄、10周龄和12周龄时滴鼻免疫小鼠共3次,可以显著降低小鼠的发病率,达到治疗1型糖尿病的作用.