可溶性E2蛋白作为抗原的检测猪瘟病毒血清抗体间接ELISA方法的建立

• 作者: 刘湘涛 刘艳红 尚佑军 尹双辉 才学鹏 蔺芳
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪瘟病毒 重组E2抗原 可溶性表达 ELISA 抗体检测
• 年，卷（期）: 2009,（12）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1529-1533
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文

摘要

以可溶性重组E2蛋白作为抗原,建立了猪瘟病毒(CSFV)血清抗体间接ELISA诊断方法(rE2-ELISA).将猪瘟疫苗毒株E2基因主要抗原区(A-D)基因克隆到表达栽体pGEX-6p-1上,转化E.coli,降低诱导温度至20℃,获得48 000大小E2融合蛋白,部分目的蛋白以可溶性形式表达.Western blotting试验证实,E2融合蛋白可以和CSFV阳性血清发生特异性结合.亲和层析纯化后的E2融合蛋白作为抗原,建立了检测CSFV血清抗体的间接rE2-ELISA方法.该方法的特异性试验结果表明,与PRRSV、PCV2、PPV和PRV阳性血清之间不存在交叉反应;用rE2-ELISA和国外同类试剂盒(CSF-Ab-Kit)检测142份田问血清样品,2种试剂盒的阳性检测率分别为83.81%和88.73%.因此,rE2-ELISA猪瘟抗体检测试剂盒具有良好的敏感性和特异性,适合应用在大规模的CSFV血清抗体的检测工作中.