TLR4基因RNA干扰载体的构建及其抑制效率比较

• 作者: 姜泓 张野 彭梅娟 徐哲 王九平 王平忠 白雪帆 黄长形
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 Toll样受体4 内皮细胞
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 277-279,282
• 页数: 4页
• 分类号: R392.9
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2009.03.012

摘要

目的 构建含有Toll样受体4(TLR4)基因特异性RNA干扰序列的pSliencer4.1-CMV neo载体,比较其对TLR4的抑制效率.方法 通过Ambion公司的在线软件设计TLR4基因(GenBank:NM138554)的RNA干扰(RNAi)序列,按siRNA设计的优化原则筛选靶序列,再选取其中部分序列进行合成,经退火、连接,构建含有TLR4基因特异性RNA干扰序列的pSliencer4.1-CMVneo载体.用脂质体SPort XP-1分别将载体及阳性和阴性对照质粒转染血管内皮细胞系EVC-304细胞,提取细胞总RNA,进行RT-PCR反应,筛选抑制效率较高的载体.结果 共设计出可供选择的序列228条,经BLAST比对后,有30条序列有较好的序列特异性,并根据其在基因中的相对位置选择9条作为siRNA靶序列.RT-PCR结果表明其中有5个载体具有较高的抑制效率,以TS4,TS6,TS8抑制效率最高,分别为89%,90%,88%,其余siRNA的抑制效率均未超过50%.抑制效果较好的5条序列在TLR4基因中的位置分别为444、1 203、1 389、2 774、3 409nt处.结论 成功构建了抑制效率较高的TLR4基因特异性RNA干扰序列的pSliencer4.1-CMV neo载体,筛选出特异性抑制TLR4表达的序列,为TLR4信号转导的研究奠定了基础.