PRRSV兰州分离株ORF3和ORF5基因的克隆与序列分析及其杆状病毒表达载体的构建

• 作者: 何生虎 刘湘涛 吴锦艳 尚佑军 满自萍 田宏 祁燕蓉 赵娜
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪生殖与呼吸综合征病毒 ORF3基因 ORF5基因 克隆 杆状病毒表达载体
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 病原生物学
• 页码范围: 189-195
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.6|Q786
• 字数: 5078字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2009.03.001

摘要

根据GenBank中猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)中国代表株CH-1a的基因组序列,设计包含完整ORF3、ORF5基因序列的2对特异引物,利用RT-PCR技术扩增PRRSV兰州分离株(Lanzhou株)的ORF3和ORF5基因,并对其进行序列测定,同时与已发表的13株PRRSV进行同源性比较.将扩增的PRRSV Lanzhou株ORF3、ORF5基因分别克隆到杆状病毒表达载体pFastBacHTA上,将经酶切及测序鉴定的阳性重组质粒pFastBacHTA-ORF3、pFastBaeHTA-ORF5分别转化到DH10Bac感受态细胞.结果显示,ORF3、ORF5基因长度分别为765 bp、603 bp,发现核苷酸的同源性分别为88.0%～99.2%、87.3%～99.0%,获得了重组转座子rBacmid-ORF3、rBacmid-ORF5.