体细胞核移植生产转ω-3脂肪酸去饱和酶基因(sFat-1)的猪胚胎

• 作者: 冯冲 刘晓 周艳荣 杨博辉 潘登科 陈红星 龙川
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 sFat-1基因 胎儿成纤维细胞 体细胞核移植
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 633-638
• 页数: 6页
• 分类号: S828.3
• 字数: 4517字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2009.05.005

摘要

本研究通过脂质体介导的方法将来源于线虫C.Briggsae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因(sFat-1)转染至大白猪胎儿成纤维细胞.采用600 μg·mL-1 G418药物浓度,经连续10 d筛选及PCR、RT-PCR鉴定,获得11个转基因阳性细胞克隆.以体外成熟42 h的猪卵母细胞与转基因细胞构建重构胚.经体外培养后观察,转基因克隆胚胎与非转基因胚胎的卵裂率(76.6%±4.1%us. 81.6%±3.1%)和囊胚率(10%±1.97%us. 9.7%±1.4%)均无显著差异(P＞0.05).采用放线菌酮进行化学二次激活时,胚胎的囊胚率显著高于采用电二次激活胚胎(20.6%±0.89%讲.10%±1.97%,P＜0.05),但二者的卵裂率并无显著差异(72.4%±4.96%us.76.6%±4.1%,P＞0.05).研究表明,通过脂质体介导的方法,可以获得转sFat-1基因大白猪胎儿成纤维细胞系;以该细胞系为核供体构建的转基因克隆胚胎与非转基因克隆胚胎的发育能力无显著差异;二次激活采片j放线菌酮进行化学激活能够显著提高胚胎的囊胚发育率.