炭疽芽胞杆菌假想S-层蛋白SLP缺失突变体的构建

• 作者: 冯尔玲 刘先凯 史兆兴 唐恒明 廖祥儒 朱力 王恒樑 高美琴
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 炭疽杆菌 S-层蛋白 基因散除
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 161-165
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 5167字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2009.02.004

摘要

目的:构建炭疽芽胞杆菌假想S-层蛋白SLP缺失突变体,以进行后续SLP的功能研究,为炭疽芽孢杆菌重要基因功能的研究建立技术平台.方法:利用PCR技术,分别扩增得到目的基因的上游同源臂(slp-F)和下游同源臂(slp-R),将抗性基因(S)和上、下游同源臂先后连入穿梭质粒pKSV7,构建打靶载体pKSV7-FSR,经去甲基化后,电转化入炭疽芽胞杆菌A16R,通过同源重组敲除slp基因,并通过DNA测序和Western blot实验验证;对野生株和突变株37℃时的生长曲线及生化反应进行比较研究.结果:分别从DNA水平和蛋白质水平证实slp基因被成功敲除;突变株对数期生长较快,衰退较慢,与野生株的生化反应差异不明显.结论:获得了炭疽芽胞杆菌假想S-层蛋白SLP缺失突变体.