pFLAG-CMV-TRAF1真核表达载体的构建及其对NF-κB信号通路的影响

• 作者: 原艳芝 姚景辉 杨晓明 汪思应 王建 王晓辉 黄晓碧
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: NF-κB 基因 转录 肿瘤坏死因子-alpha
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 147-150
• 页数: 4页
• 分类号: R329.2|R341.32|R392.11
• 字数: 2857字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2009.02.002

摘要

目的 构建人TRAF1真核表达载体,应用荧光素酶报告基因实验研究TRAF1对NF-κB报告基因活性的影响.方法 采用PCR技术扩增出TRAF1编码基因,将其构到真核表达载体pFlag-CMV-2上.用脂质体将构建的真核表达载体瞬时转染HEK293细胞,用Western blot检测TRAF1蛋白是否表达.用荧光素酶报告基因实验验证其对NF-κB转录活性的影响.结果 成功克降TRAF1编码基因至相应表达载体上.构建的TRAF1真核表达载体使HEK293细胞高表达TRAF1蛋白;在肿瘤坏死因子(TNF-α)的刺激下可以抑制NF-κB的转录活性.结论 TRAF1负调控NF-κB的活性,为进一步研究TRAF1的功能提供了线索.