山羊痘病毒p32基因原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

• 作者: 于力 王芳 雷震
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: GPV p32基因 大肠杆菌表达 ELISA
• 年，卷（期）: 2009,（12）
• 所属期刊栏目: 诊断技术
• 页码范围: 945-948
• 页数: 4页
• 分类号: S854.4
• 字数: 3309字
• 语种: 中文

摘要

为了建立山羊痘病毒(GPV)抗体快速检测方法,本研究通过人工合成密码子优化的GPV p32基因,并在大肠杆菌中进行截短表达(p32-opti).表达的重组p32-opti蛋白主要以包涵体形式存在,Western blot分析表明,p32-opti与GPV标准阳性血清具有良好的抗原性.以纯化的重组p32-opti蛋白作为ELISA包被抗原,建立间接ELISA抗体检测方法.该方法检测小反刍兽疫、蓝舌病和口蹄疫阳性血清均无交叉反应;与中和试验(VNT)比较,两者的符合率为95.7%;ELISA批内和批间重复性试验显示,OD值的变异系数小于10%.上述结果表明.该ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性.对来自黑龙江、内蒙古和新疆自治区的390份山羊和绵羊血清进行检测,抗体阳性率为80.2%,表明这些地区的山羊和绵羊群普遍存在羊痘病毒抗体.本研究建立的间接ELISA方法可用于GPV感染的流行病学调查以及疫苗接种动物的抗体水平监测.