密码子优化的H5亚型流感病毒HA基因重组质粒在哺乳动物细胞中的高效表达及其免疫原性的研究

• 作者: 刘大飞 刘明 刘春国 孙恩成 张新涛 李洪涛 杜金玲 石薇琳 谢金鑫
• 来源期刊: 自然科学进展
• 学科: 医学
• 关键词: H5亚型 流感病毒 HA 密码子优化 DNA疫苗 免疫效果
• 年，卷（期）: 2009,（8）
• 所属期刊栏目: 学术论文
• 页码范围: 813-818
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 5016字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1002-008X.2009.08.004

摘要

为了提高流感病毒血凝素(HA)基因的表达量及其免疫原性,按照哺乳动物偏爱密码子将A/Goose/HLJ/QFY/04(H5N1)流感病毒的血凝素基因进行优化改造,然后插入到真核表达载体pCI-neo中,构建了真核表达质粒pCI-opti-HA.将此质粒和含野生HA基因的真核表达质粒pCI-wt-HA分别转染Vero或293T细胞,通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)和蛋白免疫印迹(WB)实验比较HA蛋白的表达量.将两种重组质粒免疫Balb/c小鼠,比较两者诱导的抗体产生水平.三次免疫后两周用强毒攻击,通过体温和体重变化评价两种重组质粒的免疫保护效果.IP-MA和WB实验结果表明:密码子优化后,HA蛋白在哺乳动物细胞中的表达水平显著提高.酶联免疫吸附实验(ELISA)结果表明:小鼠免疫后密码子优化的重组质粒诱导的特异性抗体效价较高.攻毒试验结果表明:两种重组质粒均能够提供较好的保护.