苹果基因邻近未知序列的PCR扩增方法

• 作者: 刘庆忠 艾呈祥 苑克俊 魏海蓉
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 苹果 基因 邻近序列 酶切位点引物 法尼基焦磷酸合酶 启动子
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1083-1088
• 页数: 6页
• 分类号: S188
• 字数: 4629字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2009.06.022

摘要

利用已知基因序列设计3个巢式PCR引物p14、p15和p16,然后设计3'端为常见酶切位点、5'端为随机引物序列p17的9个酶切位点引物.用p14外引物与9个酶切位点引物进行第1轮PCR扩增,其中前5个反应采用较低的退火温度,目的是将酶切位点引物的5'端序列引入到PCR产物中,其余反应则以此PCR产物为模板采用较高的正常退火温度进行,目的是为了使整个酶切位点引物能稳定地结合到最初反应形成的产物上.为提高PCR产物的特异性和产量,用p15和p16引物分别与p17引物配对进行第2轮和第3轮PCR扩增,电泳检查发现PCR产物条带后进行纯化和测序.为保证序列的正确性,利用测得的DNA序列再设计新引物f3x,将f3x与p14(或p15)配对、直接用提取的DNA为模板进行PCR扩增和测序.利用此方法成功地获得了苹果FPPS基因邻近的启动子序列528bp和5'UTR序列142bp,并已在GenBank注册(登录号FJ263960),利用Blastn发现这是GenBank中首次发表苹果(Malus domestica Borkh.)法尼基焦磷酸合酶基因(FPPS)启动子序列.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘庆忠		192	2971	28.0	45.0
2	苑克俊		60	475	10.0	19.0
3	魏海蓉		59	564	14.0	20.0
4	艾呈祥		58	591	14.0	22.0