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微量牛卵中H1foo CDS序列的克隆及其mRNA向卵内显微注射
微量牛卵中H1foo CDS序列的克隆及其mRNA向卵内显微注射
作者:
云彦
吴苏君
胡勇策
隋进强
雷安民
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
微量卵母细胞
RT-PCR
牛H1foo基因
体外转录
摘要:
本研究旨在优化从微量卵中克降基因的条件,并构建牛H1foo基因真核表达载体.首先将微量(1~5个)卵母细胞裂解后,用改进的RT-PCR方法扩增内参β-actin基因以检测该方法扩增基因的效率,结果表明单卵扩增成功率为80%以上(10/12),3个、5个卵扩增成功率均达100%.利用该体系从微量(5个)牛卵中克隆得到H1fooCDS全长序列,测序结果显示其与GenBank上公布序列同源性为100%.将牛H1foo CDS连接至pMD19-T载体上,经酶切、测序鉴定正确后定向亚克隆到真核表达载体pVenus上,鉴定正确后命名为pVenus-H1foo.利用脂质体2000将pVenus-H1foo转染Hela细胞,24 h后通过荧光显微镜观察、RT-PCR、Western Blotting分别检测表明其能够正确表达.将H1foo体外转录为mRNA后直接注射卵母细胞,其表达产物能准确定位于卵母细胞及极体的染色体上.结果,成功构建了牛H1foo真核表达载体pVenus-H1foo,为研究该基因在卵母细胞成熟及早期胚胎发育过程中的作用奠定了基础.
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文献信息
篇名
微量牛卵中H1foo CDS序列的克隆及其mRNA向卵内显微注射
来源期刊
畜牧兽医学报
学科
生物学
关键词
微量卵母细胞
RT-PCR
牛H1foo基因
体外转录
年,卷(期)
2009,(11)
所属期刊栏目
遗传繁育
研究方向
页码范围
1630-1637
页数
8页
分类号
Q785|Q336
字数
5787字
语种
中文
DOI
10.3321/j.issn:0366-6964.2009.11.009
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主办单位:
中国畜牧兽医学会
出版周期:
月刊
ISSN:
0366-6964
CN:
11-1985/S
开本:
大16开
出版地:
北京海淀区圆明园西路2号
邮发代号:
82-453
创刊时间:
1956
语种:
chi
出版文献量(篇)
5501
总下载数(次)
6
总被引数(次)
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