猪流行性腹泻病毒N蛋白的真核表达及其亚细胞定位的初步分析

• 作者: 冯力 吕茂杰 孙东波 崔小辰 时洪艳 王承宝 申识川 范秀萍 陈建飞
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流行性腹泻病毒 核衣壳蛋白 真核表达 亚细胞定位
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 691-696
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 3896字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2009.05.014

摘要

以构建的含有编码猪流行性腹泻病毒CV777株核衣壳蛋白(N)基因的阳性质粒pMDT-18-N为模板,用含有Kpn Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点的上、下游引物扩增获得N基因,该PCR产物经Kpn Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后定向克隆到经相同双酶切的真核表达载体pcDNA3.1(+)中,经过酶切鉴定和测序鉴定,将构建的重组质粒命名为pcD-NA3.1(+)-N,且未发现碱基的缺失和插入.用脂质体法将pcDNA3.1(+)-N转染Vero E6细胞,在48 h后,以针对猪流行性腹泻病毒核农壳蛋白的鼠源多抗血清进行Western blot、免疫荧光检测,并运用共聚焦显微镜分析N蛋白的亚细胞定位.结果表明N基因能在真核细胞Vero E6中正确表达,共聚焦分析结果表明N蛋白在细胞质和细胞核中定位.