p15在杆状病毒-昆虫细胞表达系统中的表达

• 作者: 张玉静 潘风光 肖昌 胡薇 艾永兴 郑梅竹 郝军元
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: p15 AP f9昆虫细胞 状病毒
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 基础兽医学
• 页码范围: 632-636
• 页数: 5页
• 分类号: S852.2|Q78
• 字数: 4045字
• 语种: 中文

摘要

为探讨鸡p15蛋白的特性及其在细胞周期抑制通路中与其他蛋白的作用,本研究选用昆虫细胞表达系统来表达有活性的p15蛋白.为后期纯化的需要,对pFAST供体质粒的多克隆位点进行了重新改造,并成功构建带有TAP纯化标签的供体质粒pFAST-NMCS-N-TAP-p15和pFAST-NMCS-C-TAP-p15.将2个供体质粒转化到DH10Bac感受态菌中,对阳性转化子Bacmid-N-TAP-p15和Bacmid-C-TAP-p15进行反复涂板的去阴性单克隆纯化,提取大质粒Bacmid-N-TAP-p15和Bacmid-C-TAP-p15并进行转座鉴定.将纯化的大质粒Bacmid-N-TAP-p15和Bacmid-C-TAP-p15转染入sf9昆虫细胞中,72 h后收集培养上清中的杆状病毒,并进行病毒的扩增和滴度测定,结果所获2株重组杆状病毒N-TAP-p15和C-TAP-p15的滴度分别为3.6×107,5.4×107pfu/mL.将2株高滴度的重组杆状病毒再感染新培养的sf9昆虫细胞进行重组p15蛋白的表达,结果与对照组相比,重组p15融合蛋白得到了有效的表达,表达量分别为4.32%和4.7%.Western blotting结果表明,所表达的重组p15融合蛋白只特异地与p15单克隆抗体和兔的IgG反应而未与其他细胞蛋白反应;明带有TAP标签的重组p15融合蛋白在昆虫细胞表达系统中得到了有效表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	潘风光	吉林大学畜牧兽医学院	42	319	8.0	17.0
2	郑梅竹	吉林大学畜牧兽医学院	12	37	4.0	5.0
3	艾永兴	吉林大学畜牧兽医学院	23	41	4.0	5.0
4	张玉静	吉林大学畜牧兽医学院	49	120	6.0	7.0
5	胡薇	吉林农业大学生物技术学院	44	146	7.0	9.0
6	肖昌	西南大学生命科学院	8	13	3.0	3.0
7	郝军元	吉林大学畜牧兽医学院	8	14	3.0	3.0