FXYD6 shRNA表达载体的构建及其在体外对胰腺癌细胞增殖的影响

• 作者: 刘军桂 周宁新 张效东
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 离子转运调节因子 FXYD结构域 RNA干扰 短发夹RNA 重组质粒载体 胰腺癌
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 458-461
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3654字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2009.04.002

摘要

目的:构建FXYD6短发夹RNA(shRNA)表达载体,体外评价其对胰腺癌细胞sw1990的增殖与FXYD6蛋白表达的抑制效果.方法:基于microRNA mir-30天然结构,设计表达4对FXYD6 shRNA的互补DNA序列,克隆入pCGM30质粒载体,连接产物转化感受态大肠杆菌DH5a,PCR法筛选阳性克隆,经酶切和基因测序鉴定;利用LipofectAMINE2000将pCGM30-FXYD6 shRNA转染至胰腺癌细胞sw1990,MTT法检测转染后胰腺癌细胞增殖的变化,Western blot检测胰腺癌细胞中FXYD6蛋白表达水平的变化.结果:设计合成了4对表达FXYD6 shRNA的互补DNA序列,构建了4个表达FXYD6 shRNA的重组质粒;基因测序证实shRNA编码序列与设计的片段完全一致,酶切鉴定证实载体构建成功;体外实验表明,转染胰腺癌细胞sw1990的增殖能力和FXYD6蛋白表达水平明显降低(P<0.05),FXYD6蛋白表达水平随时问延长逐渐降低(P<0.01),但细胞增殖能力无明显变化(P>0.05).结论:构建了4个表达FXYD6 shRNA的重组质粒载体,可有效抑制FXYD6的表达;抑制胰腺癌细胞sw1990中FXYD6的表达可以抑制细胞的增殖,提示FXYD6可能是个具有潜在临床应用价值的基因治疗靶点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周宁新	第二炮兵总医院肝胆胃肠病研究所	33	133	8.0	9.0
2	刘军桂	第二炮兵总医院肝胆胃肠病研究所	7	64	4.0	7.0
3	张效东	第二炮兵总医院肝胆胃肠病研究所	6	37	3.0	6.0