推定铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶小亚单位的DNA结合能力检测

• 作者: 周莹冰 张克斌 李明 申晓冬 胡晓梅 胡福泉 陈志瑾
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 未端酶小业单位 噬菌体PaP3 EMSA 蛋白表达
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 379-382
• 页数: 4页
• 分类号: Q75|Q782|Q939.48
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2009.05.002

摘要

目的 检测理论推定的铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶小亚单位(pap3p01基因)编码蛋白对特异性DNA的结合能力.方法 通过PCR从噬菌体PaP3基因组扩增出pap3p01基因,克隆至表达载体pQE31,转化入大肠杆菌JMl109后,IPTG诱导表达目的 蛋白,超声裂菌后发现目的 蛋白质H6-PaP3P01存在于上清中,进而利用Ni-NTA亲合层析纯化蛋白.利用PCR与酶切方法 获取可能含有末端酶小亚单位结合位点的DNA片段,并对其3'端进行生物素标记.最后采用凝胶迁移率改变实验检测H6-PaP3P01的DNA结合能力.结果 成功构建了pQE-PaP3P01表达载体,获得的融合蛋白H6-PaP3P01表达量较高且全部存在于菌体超声后的上清中.经亲和层析初步纯化及脱盐处理后,H6-PaP3P01可与263 bp特异性DNA片段结合.结论 成功构建并表达了推定的PaP3末端酶小亚单位重组蛋白H6-PaP3P01,并且检测到了该蛋白质对特异DNA的结合能力,初步证实了理论推定的正确性,为完善PaP3噬菌体包装机制的研究奠定了基础.