猪瘟病毒E2蛋白的原核表达及抗体间接ELISA检测方法的建立

• 作者: 张蓉蓉 李坤 杨峻 温国元 王红琳 程国富 罗玲 罗青平 艾地云 邵华斌
• 来源期刊: 湖北农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪瘟病毒 E2蛋白 间接EUSA 原核表达
• 年，卷（期）: 2009,（11）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 2632-2635
• 页数: 4页
• 分类号: S852.65~+90|Q785
• 字数: 3818字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0439-8114.2009.11.004

摘要

以猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)标准强毒石门株为模板,RT-PCR扩增CSFV E2基因N端的主要抗原区(△E2).PCR产物定向克隆至原核表达载体pET-32a中,构建了重组表达质粒pET-AE2,转化Eacterium coli BL21-Codonplus(DE3),IPTG诱导重组△E2蛋白表达,经SDS-PAGE和Western-blot鉴定蛋白的正确表达.KCl预染切胶法纯化△E2蛋白,以其为包被抗原,通过反应条件的优化,建立了CSFV抗体ELISA检测方法.用该方法对331份临床血清进行检测,并与IDEXX公司阻断ELISA试剂盒进行了相符性验证,符合率为74%.为研制猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒奠定了基础.