包裹pcDNA3.1(-)/MAGE-3-HSP70壳聚糖纳米粒的制备及其特性

• 作者: 吴季霖 张红 张阳德 李坚
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 壳聚糖 纳米粒 纳米生物材料 基因载体
• 年，卷（期）: 2009,（51）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 10060-10064
• 页数: 5页
• 分类号: R318
• 字数: 5166字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.51.011

摘要

背景:裸质粒DNA在基因治疗中因带负电荷,易被体内核酸酶降解,故无法实现有效转染,壳聚糖是自然界存在的可降解性阳离子多聚糖,能有效防止DNA被核酸酶降解,提高转染效率.目的:采用复凝聚法制备包裹pcDNA3.1(-)/MAGE-3-HSP70壳聚糖纳米粒,观察其相关特性.设计、时间及地点:对比观察实验,于2009-02/08在国家卫生部纳米生物技术重点实验室完成.材料:pCDNA3.1(-)/MAGE-3-HSP70由国家卫生部纳米生物技术重点实验室构建,壳聚糖(批号060306,脱乙酰度>90.0%,黏度<100 mPa·s)由上海伯奧生物科技有限公司提供,B16细胞由中南大学肿瘤研究所惠赠.方法:采用复凝聚法制备包裹pcDNA3.1(-)/MAGE-3-HSP70壳聚糖纳米粒,将壳聚糖基因纳米粒转染B16细胞,利用反转录-聚合酶链反应检测体外转染效果;应用噻唑蓝评价壳聚糖基因纳米粒子的体外细胞毒性.主要观察指标:激光粒度仪测定壳聚糖基因纳米粒径、Zeta电位;紫外分光光度计检测包封率;凝胶阻滞实验观察壳聚糖和质粒DNA的聚合;DNase I的保护试验分析壳聚糖基因纳米粒抗核酸酶降解能力.结果:壳聚糖基因纳米粒的平均粒径约为223 nm,Zeta电位为16 mV;DNA包封率为92.3%,B16细胞转染实验显示其效率与Lipofectamine 2000相近,而其毒性远低于Lipofectamine 2000.结论:壳聚糖纳米粒子可高效装载质粒DNA转染B16细胞,而且对细胞基本无毒.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张红	中南大学湘雅医院卫生部肝胆肠外科研究中心	106	378	10.0	13.0
2	李坚	中南大学湘雅医院卫生部肝胆肠外科研究中心	52	328	10.0	15.0
3	张阳德	中南大学湘雅医院卫生部肝胆肠外科研究中心	556	4187	26.0	40.0
4	吴季霖	中南大学湘雅医院卫生部肝胆肠外科研究中心	2	5	2.0	2.0