pSUPER-Racl-siRNA质粒的构建表达及对肝癌细胞HepG2体外增殖的抑制

• 作者: 南清振 陈龙华 高蕾
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因表达 肝肿瘤,实验性 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 566-568
• 页数: 3页
• 分类号: R735.7
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2009.05.021

摘要

目的 使用pSUPER作为产生siRNA的载体,构建针对Racl的siRNA表达载体,并观察其对肝癌HepG2细胞中Racl蛋白表达的抑制作用,同时研究Racl蛋白表达抑制后肝癌细胞HepG2的体外增殖情况.方法 合成用于产生针对Racl的发卡状RNA的寡核苷酸,含64个碱基,退火后插入线性化pSUPER载体的H1启动子下游.重组载体经限制性酶切和测序,构建载体pSUPER-Racl-siRNA,并将其转染肝癌细胞系HepG2.空载体pSUPER-Control-siRNA作为阴性对照.Western blotting检测转染质粒后细胞内Racl基因的变化,MTT法检测Racl蛋白表达后体外细胞增殖情况.结果 成功构建了可以表达针对Racl的siRNA表达载体pSUPER-Racl-siRNA.转染该载体能有效地下调HepG2细胞中Racl蛋白的表达,受抑制率为82%.MTT检测结果显示,抑制Racl蛋白表达后,细胞增殖速度明显减慢.结论 成功构建了针对Racl的发卡状RNA表达载体pSUPER-Racl-siRNA,其可以高效而特异地下调HepG2细胞内靶基因Racl的表达.Racl蛋白沉默对肝癌细胞增殖具有明显的抑制作用,说明其在细胞的体外生长过程中具有重要作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈龙华	南方医科大学附属南方医院放疗科	152	837	14.0	18.0
2	南清振	南方医科大学附属南方医院消化研究所	21	41	4.0	5.0
3	高蕾	南方医科大学附属南方医院放疗科	4	1	1.0	1.0