一商品猪SLA-1分子复合体的体外构建

• 作者: 夏春 方勤美 李云岗 李新生 郝惠芳 高凤山
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 复合体 圆二色谱:SLA-I
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 兽医
• 页码范围: 1421-1427
• 页数: 7页
• 分类号: S8
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.04.036

摘要

[目的]研究中国北方杂交商品猪SLA-I类分子结构特点,并为进一步的多肽结合等功能研究奠定基础,需要在体外构建正确折叠的SLA-I类分子复合体.[方法]以长白-达兰商品猪为研究材料,克隆SLA-2和β2m.然后采用剪接重叠延伸PCR(splicing overlap extention PCR,SOE PCR)法,将SLA-2的胞外区和β2m的成熟肽部分通过一富含甘氨酸/丝氨酸的Linker(G4S),连接,形成SLA-2-Linker-β2m全长,并插入原核表达质粒pMAL-p2X,转化E.coll TB1,IPTG诱导表达.表达得到的融合蛋白分别经过Western-blot、纯化及Factor Xa切割,分离纯化单体蛋白.圆二色谱(circular dichroism spectrum,CD)测定蛋白的二级结构.[结果]SDS-PAGE和Western-blot均证实融合蛋白MBP-SLA-I大小为84.1 kD.SLA-I单体蛋白大小为41.6 kD.圆二色谱分析单体蛋白和融合蛋白二级结构元件α-螺旋、β-折叠、转角和随机卷曲的符合率分别达到了100%、90.6%、88.5%和96.9%.[结论]结果表明重构的SLA-I复合体具有正确的二级结构,可以用于体外多肽结合等研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	夏春	中国农业大学动物医学院	68	1187	22.0	31.0