SHIP基因真核表达载体的构建、鉴定及对白血病细胞系K562的抑制作用

• 作者: 刘小军 成志勇 杜行严 杨晓阳 杨琳 武学文 温树鹏 罗建民
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 转染 质粒 SHIP 白血病 K562细胞
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 169-172
• 页数: 4页
• 分类号: R733.7
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2009.02.013

摘要

目的 构建真核表达质粒pCAC-IRESSHIP-GFP,并观察其在K562细胞中的表达. 方法 将SHIP基因的RT-PCR产物克隆入载体pCAG-IRES-GFP,经酶切、鉴定及测序分析,构建pCAG-IRESSHIP-GFP重组真核表达质粒.实验设置3个组:K562组(未转染)、K562/IRES组(转染宅载体pCAG-IRGA-GFP),K562/SHIP)组(转染重组质粒pCAC-IRES-SHIP-GFP).荧光显微镜和流式术榆测重组质粒的转染效率;Western blotting检测各组SHIP蛋白的表达及Akt磷酸化水平变化;MIT法和流式术分析SHIP基凶转染对细胞增殖的影响. 结果 重组质粒pCAG-IRESSHIP-GFP已成功载人SHIP的全长编码基凶,序列测定的结果与预期设计完全一致.荧光显微镜在K562/SHIP组町见绿色荧光,转染效率为4&2%±6.6%.Westem blotting显示K562/SHIP组有明显的SHIP蛋白表达,且p-Akt-308和p-Akt-473的水平(分别为0.182和0.381)较K562/IRES组(0.361和0.716)和K562组(0.365和0.725)明显下降(P＜0.01).流式术分析显示K562/SHIP组细胞生长减慢,G0/G1期细胞增多、G2/M期细胞减少,增殖指数降低. 结论 成功构建了3 585bp的SHIP基因真核表达质粒pCAG-IRES-SHIP-GFP,并在K562细胞中表达.外源性SHIP基因转染能使K562细胞增殖受抑,原因可能与Akt的磷酸化下调有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗建民	河北医科大学第二医院血液科	78	271	8.0	11.0
2	杨琳	河北医科大学第二医院血液科	53	201	8.0	11.0
3	温树鹏	河北医科大学第二医院血液科	30	78	5.0	7.0
4	刘小军	河北医科大学第二医院血液科	19	53	5.0	6.0
5	武学文	河北医科大学第二医院血液科	4	6	1.0	2.0
6	杜行严	河北医科大学第二医院血液科	28	158	7.0	10.0
7	成志勇	河北医科大学第二医院血液科	17	92	7.0	9.0
8	杨晓阳	河北医科大学第二医院血液科	7	34	4.0	5.0