FGFR3真核表达载体的构建及其在人白血病细胞系K562中的表达

• 作者: 孙艳 李校堃 杜彤华 肖业臣 许会静
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 受体,成纤维细胞生长因子,3 型 真核表达载体 K562 细胞系 基因转染 白血病,粒-单核细胞,慢性
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 465-470
• 页数: 6页
• 分类号: R733.72
• 字数: 3591字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20140301

摘要

目的：构建成纤维细胞生长因子受体3（FGFR3）真核表达载体 MSCV／puro-fgfr3-WT和 MSCV／puro-fgfr3-DN，并检测 FGFR3蛋白在人白血病细胞系 K562中的表达。方法：通过 PCR 法获得 FGFR3全长基因（fgfr3-WT）和截短失活型的 FGFR3（fgfr3-DN），经双酶切后与真核表达载体 MSCV／puro 连接，构建 MSCV／puro-fgfr3-WT和 MSCV／puro-fgfr3-DN重组表达质粒。经PCR、双酶切及测序鉴定正确后，脂质体介导转染至人白血病细胞系K562中，经 puromycin抗性筛选后，Western blotting法和流式细胞术检测细胞中 FGFR3蛋白的表达。结果：PCR 法鉴定 MSCV／puro-fgfr3-WT 和 MSCV／puro-fgfr3-DN 重组质粒，2个质粒分别扩增出2400 bp的 fgfr3-WT全长基因片段和1200 bp 的 fgfr3-DN 截短型片段，表明成功扩增 fgfr3-WT 全长基因和1200 bp的 fgfr3-DN基因；双酶切 MSCV／puro-fgfr3-WT重组质粒，获得2400 bp的目的基因片段；测序显示， fgfr3-WT片段大小为2400 bp，Blast对比分析表明测序结果与 GenBank中的 FGFR3序列完全一致。fgfr3-DN片段大小与预先设计的序列完全一致，表明成功构建野生型 FGFR3和突变失活型 FGFR3真核表达载体；Western blotting 检测，与对照组（K562-MSCV）比较，MSCV／puro-fgfr3-WT转染组（K562-WT）FGFR3蛋白表达水平增加，表达水平是对照组的10倍以上；MSCV／puro-fgfr3-DN 转染组（K562-DN）的截短型的 FGFR3（K562-DN）高表达，而对照组和K562-WT转染组则无此片段；流式细胞术检测，K562-WT组有57.5％的细胞高表达 FGFR3，K562-DN组有41.5％的细胞高表达 FGFR3-DN。结论：成功构建高表达野生型和突变型FGFR3的人白血病细胞系K562。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙艳	吉林大学第二医院肿瘤血液内科	38	223	7.0	14.0
2	李校堃	吉林大学基础医学院生物化学教研室	7	28	3.0	5.0
3	杜彤华	吉林大学第二医院肿瘤血液内科	7	6	1.0	1.0
4	肖业臣	吉林大学基础医学院生物化学教研室	3	5	2.0	2.0