产毒型O139群霍乱弧菌特异性基因序列实时荧光双重TaqMan聚合酶链反应快速检测体系的建立

• 作者: 吴丽娟 杨辉 汪仕奎 胡继红 蔡剑平 龚成
• 来源期刊: 中国卫生检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 产毒型O139群霍乱弧菌 实时荧光TaqMan聚合酶链反应 霍乱肠毒素
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 742-745
• 页数: 4页
• 分类号: R378.3
• 语种: 中文

摘要

目的:建立针对O139群霍乱弧菌的高敏感、高特异的实时荧光双重TaqMan聚合酶链反应快速检测体系.方法:根据O139群霍乱弧菌主基因组O抗原编码基因rfb-O139和霍乱弧菌肠毒素A亚基的编码基因ctxA的特异性序列设计引物及探针,利用TaqMan标记探针和便携式Smartcycler Ⅱ荧光实时PCR检测平台探讨该检测体系的检测敏感性,用19种其他肠道致病菌或院内感染中的常见致病菌评价该检测体系的特异性.结果:实时荧光双重TaqMan聚合酶链反应快速检测体系对O139群霍乱弧菌的检测敏感度为1.0×102拷贝每反应体系;对O139群霍乱弧菌基因组DNA的检测敏感度为1.0×102pg每反应体系;该检测体系在检测19种其他肠道致病菌或院内感染中的常见致病菌时均不存在非特异性扩增;整个反应在2 h内完成.结论:本研究建立的实时荧光双重TaqMan聚合酶链反应检测体系可作为O139群霍乱弧菌特异、敏感、快速的检测手段,并可同时检测O139群霍乱弧菌产生霍乱肠毒素的能力.