可溶性HLA-A2-IgGFc融合蛋白在昆虫细胞的表达及鉴定

• 作者: 丁岩冰 季明春 王丽珩 田芳 肖炜明 龚卫娟
• 来源期刊: 实用临床医药杂志
• 学科: 医学
• 关键词: sHLA-A2 IgGFc 融合蛋白 杆状病毒-昆虫细胞表达体系
• 年，卷（期）: 2009,（23）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 18-21,31
• 页数: 5页
• 分类号: R392.33
• 字数: 3220字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-2353.2009.23.005

摘要

目的 利用杆状病毒-昆虫细胞表达体系制备可溶性HLA-A2与免疫球蛋白IgGFc段的融合蛋白.方法 首先将可溶性HLA-A·0201和IgG3分子Fc段的cDNA基因插入杆状病毒表达载体pFastHTa, 形成重组载体pFHT-sHLA-A·0201-IgGFc.将该重组载体转化DH10Bac大肠杆菌, sHLA-A·0201-IgGFc基因同源重组入菌体内杆粒(Bacmid)中.抽提阳性杆粒,转染昆虫细胞Sf9, 72 h收集病毒上清.再将病毒上清感染Sf9细胞, 96 h收集细胞并裂解, SDS-PAGE观察其表达.细胞裂解液经Ni+-NTA树脂纯化Western-blot法鉴定其蛋白质序列,间接ELISA法鉴定是否形成正确构象.结果 融合蛋白不仅与HLA Ⅰ类分子的构象特异性抗体(W6/32)结合,还与羊抗人IgG抗体结合.结论 所制备可溶性HLA-A2-IgGFc融合蛋白序列正确,并在体外形成正确空间构象.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	季明春	扬州大学医学院免疫学教研室	80	256	7.0	12.0
2	龚卫娟	扬州大学医学院免疫学教研室	81	302	10.0	13.0
3	王丽珩	扬州大学医学院免疫学教研室	5	5	2.0	2.0
4	肖炜明	扬州大学第二临床医学院消化科	34	180	8.0	12.0
5	丁岩冰	扬州大学第二临床医学院消化科	28	112	6.0	9.0
6	田芳	扬州大学医学院免疫学教研室	17	36	3.0	5.0