PCR产物与结核分支杆菌分子信标杂交优化及荧光检测的初步实验研究

• 作者: 冯怀志 匡红 孙薏 府伟灵 张聪 李硕 陈庆海
• 来源期刊: 四川医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 分子信标 结核分支杆菌 PCR 荧光分光光度计
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 基金论文
• 页码范围: 783-785
• 页数: 3页
• 分类号: Q78
• 字数: 3166字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-0501.2009.06.001

摘要

目的 建立PCR反应后再加入结核分支杆菌分子信标杂交试验,优化杂交条件.并对分子信标PCR杂交产物荧光信号的观测条件进行摸索.方法 通过对杂交温度、杂交时间以及杂交方式的优化,建立PCR反应后再加入TB分子信标杂交试验.运用荧光分光光度计和荧光显微镜对MB PCR杂交产物荧光信号的观测条件进行摸索.并进行不同荧光-淬灭分子对标记分子信标的观测试验.结果 PCR反应后再加入,TB分子信标杂交试验中水浴、PCR仪、恒温摇床的最适杂交温度和适杂时间分别为:55℃,6h;55℃,4h;50℃,7h.阴-阳性效果区分;水浴＞恒温摇床＞PCR仪.荧光分光光度仪检测MB PCR杂交阳性产物、MB PCR杂交阴性产物(茎环结构未打开)、无游离分子信标探针PCR产物(空白对照)三者的荧光光亮度比值为:6.102/0.136/0.003.荧光显微镜观测MB PCR杂交阳性产物、MB PCR杂交阴性产物(茎环结构未打开)荧光强度明显区别.本试验Cy3-BDH组成分子信标荧光-淬灭效率较Cy3-DABCLYE高,FAM-DABCLYE组成分子信标荧光.淬灭效率较FAM-BDH高.结论 建立起结核分支杆菌分子信标荧光芯片的检测技术,包括样本制备、芯片制备、杂交反应以及扫描和图像分析等方法 .并兼顾到各种因素对单侧延长臂分子信标芯片的影响,对反应体系中各条件进行了合理的优化,使所建立的检测体系稳定可靠.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	府伟灵	第三军医大学西南医院检验科	406	5132	33.0	56.0
2	孙薏		23	168	8.0	12.0
3	李硕		50	156	7.0	9.0
4	匡红		37	152	7.0	10.0
5	冯怀志		54	154	7.0	9.0
6	陈庆海	第三军医大学西南医院检验科	59	381	9.0	18.0
7	张聪		74	321	10.0	12.0