大分子BAC基因打靶载体转染鸡胚原始生殖细胞

• 作者: 刘晋荣 唐冬生 张细权 施振旦 曾芳 蒋泓 龚道元
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 原始生殖细胞 鸡胚 BAC 大分子 转基因
• 年，卷（期）: 2009,（10）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 1918-1922
• 页数: 5页
• 分类号: R394.2
• 字数: 5033字
• 语种: 中文

摘要

背景:利用原始生殖细胞技术可以方便地将各种外源基因转入鸡体内,以较快的速度获得转基因鸡,但到目前为止原始生殖细胞的转染效率仍然很低,且很难进行较大基因片段的转染.目的:拟实现大分子BAC载体埘鸡胚原始生殖细胞的转染.设计、时间及地点:基因水平的细胞学体外观察,于2006-08/2008-07在广东省佛山大学完成.材料:种蛋来自华南农业大学鸡场粤黄鸡群,受精蛋在37.5℃、相对湿度为65%的条件卜孵化68～72 h.BAC-TDN-GID 载体由佛山大学分子生物学实验室保存.方法:以rRNA基因及其间隔序列作为同源重组引导序列,构建含GFP基因和hlFN基因的大分子BAC基因打靶载体,将鉴定为阳性的载体进行扩增培养并大昔抽提.取课题组孵化至第19期的粤黄鸡胚,挑取其生殖嵴或性腺,胰酶消化法获得原始生殖细胞,并辅以饲养层和生长因子进行培养.采用脂质体介导法在原始生殖细胞内进行基因转移,对存活的细胞进行目的基因DNA水平和RNA水平鉴定. 结果:第19期鸡胚件腺原始生殖细胞体外培养48 h呈桑椹状或者椭圆状,72 h形成细胞集落,过碘酸染色呈紫红色.分子量达30 kb的大分子转基冈载体BAC-TDN-GID转染鸡胚原始生殖细胞48 h可见荧光细胞,表明转染成功.经PCR和RT-PCR鉴定,证实扩增的产物大小与预期结果大致相吻合,目的基囚hlFN已经整合进入原始生殖细胞基因组,并已开始表达.结论:实验成功将大分子BAC载体上的外源基因转染入体外分离培养的鸡胚原始生殖细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张细权	华南农业大学动物科学学院动物遗传育种与繁殖系	109	1363	19.0	31.0
2	施振旦	华南农业大学动物科学学院动物遗传育种与繁殖系	76	873	18.0	24.0
3	唐冬生	佛山大学医学院医学检验系	13	104	5.0	10.0
4	蒋泓	佛山大学医学院医学检验系	5	12	2.0	3.0
5	曾芳	佛山大学医学院医学检验系	2	3	1.0	1.0
6	刘晋荣	佛山大学医学院医学检验系	1	2	1.0	1.0
7	龚道元	佛山大学医学院医学检验系	1	2	1.0	1.0