抗HepG2核糖体展示抗体库的构建

• 作者: 冯娟 刘洪云 周凤云 周雷 李文秀 毛伟平 魏传静
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 核糖体展示 单链抗体 肝癌 抗体库
• 年，卷（期）: 2009,（13）
• 所属期刊栏目: 农业生物技术
• 页码范围: 5886-5888
• 页数: 3页
• 分类号: Q78
• 字数: 2718字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2009.13.028

摘要

[目的]构建鼠源抗HepG2核糖体展示抗体库.[方法]以培养的HepG2肝癌细胞4次免疫Balb/c小鼠,取脾脏分离总RNA,逆转录合成第一条链,PCR扩增重链可变区和轻链k,经linker DNA连接形成VH/k核糖体展示抗体库.将VH/k与pMD18-T载体的连接产物转化E. Coli TG1,蓝白斑筛选,挑取白色菌落,提取质粒,PCR鉴定,并测序.[结果]VH和k链得到正确的扩增,长度分别为399和647 bp,VH/k连接产物正确,连接产物长度为1 093 bp.[结论]所采用的引物及反应条件能够扩增出目的基因,成功构建了鼠源抗HepG2核糖体展示抗体库,为进行核糖体展示体外筛选抗HepG2特异性单链抗体奠定基础.