抗ICOSL核糖体展示单链抗体库的构建

• 作者: 严浩 刘小綪 孟素芳 毛伟平 王文倩 王芳 邵峦峦
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: ICOSL(可诱导共刺激因子配体) 单链抗体 核糖体展示技术 原核表达
• 年，卷（期）: 2013,（33）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 12819-12822
• 页数: 4页
• 分类号: S188
• 字数: 4002字
• 语种: 中文

摘要

[目的]构建出鼠源抗ICOSL核糖体展示抗体库.[方法]通过RT-PCR从人B淋巴瘤细胞Daudi的总RNA中扩增出ICOSL胞外区基因,并将此基因插入到原核表达载体pET28a中进行表达.以表达纯化的ICOSL蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠,取小鼠脾脏提取总RNA,通过RT-PCR扩增小鼠的重链可变区和Linker(VH-linker)序列,以及轻链可变区和Linker(Vκ-linker)序列.经重组PCR将两段基因连接起来,将VH/κ与pMD19-T载体链接产物转化E.coli DH 5α,PCR鉴定并测序.[结果]VH和κ链得到正确的扩增,长度分别为421和689 bp,VH/κ连接产物正确,连接产物长度为1079 bp.[结论]所采用的引物及反应条件能够扩增出目的基因,成功构建了鼠源抗ICOSL核糖体展示抗体库,为进行核糖体展示体外筛选抗ICOSL特异性单链抗体奠定基础.