火棘基因组DNA的提取和RAPD稳定的反应体系的建立

• 作者: 韩颖
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 火棘 RAPD 反应体系
• 年，卷（期）: 2009,（19）
• 所属期刊栏目: 农业生物技术
• 页码范围: 8876-8878,8880
• 页数: 4页
• 分类号: Q949.751.9
• 字数: 4390字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2009.19.034

摘要

[目的]研究提取火棘基因组DNA的最佳方法,并研究适合火棘的稳定的RAPD反应体系,为以后开展火棘的遗传多样性研究、物种资源研究和亲缘关系鉴定等提供重要的参考.[方法]采用改进的CTAB法,成功地提取了火棘基因组DNA, 并对RAPD反应体系中的Taq酶、MgCl2、dNTPs和引物4个因素进行4因素4水平的正交试验设计,从中筛选出最佳的优化条件.[结果] 电泳结果显示,DNA无降解,杂质少.DNA浓度较高约为500 ng/μl.并以此DNA为模板,成功地建立了RAPD稳定的反应体系:总体积25 μl, 包括25 ng的DNA,1×buffer,2.3 mmol/L MgCl2,1.0 μmol/L引物,0.15 mmol/L dNTPs和2.0 U的Taq DNA聚合酶.RAPD扩增程序为:先在94 ℃下变性4 min,然后在94 ℃下变性40 s,36.8 ℃下复性50 s,72 ℃下延伸70 s,反应40个循环,最后72 ℃延伸4 min.[结论] 改进的CTAB法能成功地提取火棘基因组DNA,利用正交试验设计所建立的RAPD反应体系,可以获得较为稳定、可靠的扩增产物.该体系可应用于火棘遗传多样性、亲缘关系等方面的研究中,为进一步开展火棘分子生物学研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩颖	西南科技大学生命科学与工程学院	8	13	2.0	3.0