牛γ-干扰素ELISA检测方法的建立与初步应用

• 作者: 孙林 孟闯 徐正中 潘志明 焦新安 牛中伟 陈祥 黄金林
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 牛 γ-干扰素 抗原捕获ELISA 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 54-59
• 分类号: R392.11
• 字数: 3607字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-6422.2010.04.010

摘要

以纯化的rHis-BoIFN-γ制备兔多抗血清,辛酸-硫酸铵两步法对体内诱生的抗rBoIFN-γ单抗腹水进行纯化,用美洲商陆素(Pokeweed mitogen,PWM)刺激奶牛全血产生的分泌性天然BoIFN-γ筛选出与之反应最佳的单抗5E11.将单抗5E11以40μg/mL浓度包被,与1∶3 000倍稀释的兔抗rHis-BoIFN-γ多抗血清(13.8μg/mL)配对,以1∶6 000稀释的商品化酶标羊抗兔IgG为指示抗体,建立了BoIFN-γ抗原捕获ELISA检测方法,该方法可以检出2.56U/100μL(30.5pg/100μL)的rHis-BoIFN-γ、8U/100μL的rBac-BoIFN-γ和1U/100μL的分泌性天然BoIFN-γ.以商品化试剂盒作为平行对照,将获得的奶牛临床检测血浆样品使用BoIFN-γ抗原捕获ELISA法进行检测,结果显示两种方法检测符合率达到83.9%.本研究建立的BoIFN-γ抗原捕获ELISA检测方法可有效检测分泌性IFN-γ,为进一步开发BoIFN-γ ELISA检测试剂盒奠定了基础.