一种可用于多DNA片段连接的新SOE-PCR方法

• 作者: 万成松 张玲 朱利 杨瑜 熊建英 赵卫 钟志成 马丹娟 黎诚耀
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 重叠延伸PCR(SOE-PCR) 突变 多片段连接 EIAV PLG3-8
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 硕博专栏论著
• 页码范围: 253-257
• 分类号: Q939.47
• 语种: 中文

摘要

目的 通过对重叠延伸PCR技术的改进,建立一种可用于多DNA片段连接的SOE-PCR方法 .方法 扩增获得相互重叠的1.8、1.1、1.3 kb的短片段,以之作为亚片段模板.在SOE-PCR反应体系中加入不同数量用于重叠的亚片段模板及延伸所得目的 长片段扩增所需的外引物,同时加入了稀释100倍的内引物,使得亚片段模板在扩增过程中能动态达到最佳重叠延伸浓度.结果 获得了特异性强、丰度高的两段连接产物,与原有的SOE-PCR方法相比,大大减小了反应的非特异性条带扩增,产物丰度也优于传统的扩增方法 .采用同样方法尝试了单管反应对三个片段进行连接,获得了总长度为4.2 kb的长片段,且实验重复性、特异性好.结论 本研究以相互重叠的多个短片段为模板,实现多片段的连接和扩增,可降低受模板浓度条件的影响的实验操作难度.多片段连接时减少了操作步骤和突变几率,可广泛用于多DNA片段连接操作.