高尔基体膜蛋白GP73小干扰RNA质粒的构建及稳定干扰GP73细胞株的筛选

• 作者: 管楷 钟辉 黄蓓
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: 高尔基体 膜蛋白质类 RNA,小分子干扰 细胞增殖 质粒
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 436-439
• 分类号: Q244
• 字数: 2688字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2010.05.010

摘要

目的 构建高尔基体膜蛋白73(Golgi membrane protein 73, GP73)小干扰RNA(siRNA)真核表达载体,筛选出稳定干扰GP73的细胞株.方法 根据文献报道的序列和载体的黏性末端,设计合成2条针对GP73的DNA序列,退火后连接到载体pSUPER.retro.neo+gfp上,经测序分析正确后,质粒命名为psiGP73.用脂质体转染质粒到肝癌细胞系HepG2中,经G418加压筛选稳定表达GP73 siRNA的细胞株,用免疫印迹检测质粒对内源GP73的干扰效果,将干扰效果好的细胞株命名为HepG2/siGP73.用MTT法检测GP73被干扰下调后对细胞增殖的影响.再通过贴壁非依赖性生长试验检测GP73被干扰下调后对细胞贴壁非依赖性生长的影响.结果 免疫印迹结果 证实构建的psiGP73质粒能够有效干扰细胞内源GP73的表达.GP73被干扰下调后,HepG2细胞的增殖速度降低,在软琼脂中克隆形成减慢.结论 成功构建了表达GP73 siRNA的质粒psiGP73,筛选出稳定干扰GP73表达的细胞株HepG2/siGP73,为深入研究GP73在肝癌发生中的作用提供了平台.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钟辉	军事医学科学院生物工程研究所	47	246	8.0	14.0
2	黄蓓	安徽大学生命科学学院	33	150	7.0	11.0
3	管楷	安徽大学生命科学学院	1	1	1.0	1.0