禽流感病毒H5N1全基因组克隆与分析

• 作者: 张衡 曾俊 李卫中 李康生 王革非 陈小璇 陈幼莹
• 来源期刊: 微生物学免疫学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 流感病毒 H5N1 克隆 反向遗传 序列分析
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 分子生物学
• 页码范围: 7-13
• 页数: 7页
• 分类号: R373.1|Q939.4
• 字数: 3850字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-5673.2010.01.002

摘要

为明确广东地区分离的一株禽流感病毒H5N1的遗传背景,建立流感病毒反向遗传的平台.对该株禽流感病毒进行了空斑纯化与组织细胞培养,检测其在MDCK细胞中的增殖特性;利用H5N1病毒通用引物,通过RT-PCR对该病毒全基因组的8条片段进行全长克隆及测序分析;将H5N1的8条全长基因组片段分别插入反向遗传通用载体中,构建禽流感病毒H5N1的感染性克隆.结果表明,该H5N1毒株在MDCK细胞中可不依赖胰酶进行有效增殖与复制,可使MDCK细胞出现典型细胞病变,具有高致病性禽流感病毒的细胞增殖特征.RT-PCR克隆得到该H5N1毒株的PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS八条全长片段,经测序分析确认该毒株的基因序列,其内部编码序列出现多处突变,其中HA连接肽为多个连续碱性氨基酸,表明该毒株可不依赖胰酶进行有效复制,与细胞培养结果一致,未出现抗药性的遗传突变.PCR与测序证明,插入H5N1八个全长基因组片段的载体序列完全正确,表明成功构建了该毒株的感染性克隆.为明确病毒遗传信息,建立流感病毒反向遗传的平台,为进一步研究禽流感病毒相关疫苗提供了研究基础.